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IOS技术原理

基于吉锐生物独家专利IOSIntegration Operating System)重组技术,我们可为您提供目的基因的沉默稳定株系构建服务。我们利用IOS技术,将目的shRNA靶点定点整合到经过筛选验证过的基因组高表达活性位点中, 这些位点不仅安全(无基因),而且基因表达量更高(活跃表达位点),因此可以实现shRNA的高活性转录表达,进而对目的基因造成干扰,达到目的基因沉默的目的,并能长期稳定遗传,构建稳定细胞株系。实验周期只需(9-12周)。除此之外,我们也可以提供瞬时表达服务,构建瞬转株系。

技术原理示意图:

 

基因过表达细胞株构建

  

实验流程 

 


 实验案例

1. 构建 3 shRNA 载体,并筛选沉默效率最高的载体;

2. 设计特异性的 Oligo

3. 电转 shRNA 载体、Oligo RP 蛋白至HepG2细胞中;

4. 药杀细胞池,获得稳转细胞池;

5. 单克隆生长及Q-PCR验证(图1);
6. 获得 稳定沉默的 HepG2细胞株;


1Q-PCR检测不同克隆株目的基因表达情况


Q-1:请问贵公司 IOS 技术做 knock down 的优势在哪里?

Q-1shRNA 整合效率高,筛选的阳性株系能够长期稳定遗传,试验周期短,大概为 2 个月。


Q-2IOS 技术做 knock down 跟慢病毒方法比有什么优势?

A-2首先,RNAi的效率要比用慢病毒的方法高,并且能稳定遗传的代数比慢病毒的方法要多,保证最终提供 knock down 株系,基因效率下调 60% 以上。


Q-3shRNA 整合到基因组上大概什么位置,能否稳定遗传?

A-3shRNA 整合到目的基因附近,分析目的基因的表达,通过抗性筛选出来的阳性克隆都是可以长期稳定遗传的。


Q-4IOS 技术做基因的 RNAi,能应用于植物吗?

Q-4是可以的,已在烟草、水稻等模式植物中,得到验证。


Q-5:后期筛选鉴定都用什么技术呢?

A-5我们默认为 real time PCR 验证,如果客户有需要,我们可以进行 WB 验证,可以客户提供抗体也可以我们代买抗体。


Q-6:通常构建 shRNA 载体只构建一条吗?如果 shRNA 不工作,那重新构建会需要多长时间?

A-6 我们会同时设计合成 3 shRNA,对 shRNA RNAi 的效果做一个初步的验证,选用RNAi效果最好的一条做稳转株筛选,保证最后能拿到 knockdown 阳性克隆。




目的基因沉默是研究基因功能常用的手段之一。吉锐生物拥有的独家 IOS 专利技术可以快速、高效的将 shRNA 整合到细胞的基因组中,实现目的基因的稳定沉默,该方法具有以下独特的优势:

1. shRNA 为定点整合,非随机整合;

2. shRNA 为稳定遗传,传代过程中,不会丢失;

3. 保证细胞传代过程中,基因的沉默效率保持一致,方便进行科学研究;


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