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IOS技术原理   

基于吉锐生物独家专利IOSIntegration Operating System)重组技术,我们可为您提供目的基因的过表达稳定株系构建服务。我们利用IOS技术,将目的基因定点整合到经过筛选验证过的基因组高表达活性位点中, 这些位点不仅安全(无基因),而且基因表达量更高(活跃表达位点),因此可以实现目的基因过表达,并能长期稳定遗传。实验周期短(8-12周),整合效率高。基因整合不限长度,并可同时整合多个基因,实现多基因共表达。

技术原理示意图:

 

基因过表达细胞株构建

客户提供 吉锐生物提供 周期
提供细胞株及培养条件 荧光定量PCR验证的单细胞克隆 9-12
提供要过表达基因的cDNA 详细的项目报告

由单细胞生长的速度决定


服务流程 



实验案例

1、设计特异性的Oligo
2、电转定点整合载体(包含RFP基因)、OligoRP蛋白至CHO-K1细胞中;
3Puromycin/G418药杀细胞池,获得稳转细胞池;
4、单克隆生长及Q-PCR验证(图1);
5、获得RFP蛋白稳定表达的CHO-K1纯克隆(图2);


1Q-PCR检测不同克隆株RFP基因表达情况


荧光显微镜下(100X)红色荧光蛋白            自然光(100X

     图2IOS技术构建RFP基因稳转株后显微镜观察结果


Q-1:此基因重组技术的专利是吉锐生物独家拥有吗?

A-1:吉锐生物独家拥有 10 IOS技术专利保护, 由吉锐生物独家进行商业化开发。


Q-2IOS 技术构建稳转细胞株相对于其他技术有什么优势?

A-2IOS 技术不同于传统的任何技术,它是让目的基因定点整合,其它的技术都是随机整合;

我们选择的位点是基因组上的高表达位点,所以可确保目的基因的高表达;整合后目的基因是稳定遗传;

而其它的技术都是随机整合,且基因不稳定,传代几次后基因会丢失。


Q-3:这个技术做的稳转株能够稳定传代多少代?

A-3:只要细胞本身传代没问题,IOS 技术的稳转株至少可以保证稳定传代 20 代。


Q-4IOS技术做过表达最低可以保证过表达多少倍?

A-4Genloci专利的 IOSIntegration Operating System)重组技术可以实现目的基因过表达量最高达上百倍,具体目的基因过表达倍数由目的基因的本底表达量而定,相对于慢病毒包装所能达到的 5 倍左右,非常有优势。


Q-5:可以加标记基因吗?

A-5:可以根据客户的要求在目的基因N端或者 C-端添加各种蛋白标签或者 EGFP 等报告基因,并随目的基因一起稳定遗传,可与目的基因同一个启动子,也可以不同启动子。


Q-6IOS 技术将目的基因整个到基因组上什么位置,可以是客户指定位置吗?

A-6:目的基因整合的位点是在我们开发 IOS 技术的时候前期筛选到的整合位点,不是随机的,这些位点安全且活跃性高,已经过验证。


Q-7:后期筛选鉴定都用什么技术呢?

A-7:后期单克隆筛选我们默认为 Real-time PCR 验证,如果客户有需要,我们可以进行 WB 验证,可以客户提供抗体也可以我们代买抗体。

 

Q-8IOS专利技术是否有相关文献支持?

A-8IOS技术一直应用于生物制药领域,用于科研方向才刚刚开始,所以暂时没有文章支持,但是,吉锐生物已经给超过50余位客户提供过过表达细胞株构建的服务。

 

Q-9:我想请教一下,后期筛选的时候用有限稀释的方法一个 96-孔板大约能有多少个孔是单个细胞?一般您在具体操作过程中一次要做多少块 96-孔板?

A-9:用有限稀释的方法一个 96-孔板大约能有 7-8 个克隆,依细胞性质而定,可以在实验之前先有限稀释摸索一下,这样再做单克隆筛选的时候比较清楚。通常实验一般会做 3-5 块板96-孔板,整合效率低时会多做几块,反之少做几块。

 







目的基因过表达是研究基因功能常用的手段之一。吉锐生物拥有的独家IOS专利技术可以快速、高效的将目的基因整合到细胞的基因组中,该方法具有以下独特的优势:

1. 定点整合,非随机整合;

2. 稳定遗传,传代过程中,基因不会丢失;

3. 基因大小不影响整合的效率;

4. 定点整合的位点为高表达位点,基因的表达量高;

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