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技术原理

Genloci的蛋白表达专家开发出独特的以哺乳动物细胞CHO为表达载体的真核表达系统,利用吉锐生物专利的 MCI 技术,将目的基因的多个拷贝定点整合到基因组高表达位点中,同时实现稳定遗传。高效的转染技术,可以低成本,短周期为您提供mg级的高质量抗体,解决传统的表达系统所面临的多种缺陷,帮助您快速获得满意的实验结果。

实验流程:

1. 亚克隆:将客户优化好的抗体轻重链序列(Genloci也可以提供基因优化服务)克隆到吉锐生物定点整合载体上;
2. 转染:采用独家的CHO-MCI(多拷贝整合)技术,将定点整合载体电转到CHO-SC细胞中;
3. 稳转池验证:100ml摇瓶小试表达目的抗体和纯化。将细胞表达上清通过Protein A柱纯化后,跑SDS-PAGE,同时通过上牛血清白蛋白(BSA)作为控制带进行定量和纯度分析。
4.扩大培养:根据100ml的定量结果,估算获得客户要求数量的蛋白所需要扩大培养的体积,拿到足够量的抗体。

案例 1:

Figure1.SDS-PAGE电泳检测:抗体Y/CHO-S


案例 2:

      利用MCI技术将红色荧光蛋白基因定点整合到CHO-K1细胞基因组中,配合使用Genloci®独创产品Cell Plaza®(GP5036)筛选阳性克隆,扩大培养后,在倒置显微镜下和荧光显微镜下观察细胞。

Figure2.自然光下观察CHO-K1细胞(100×)和红色荧光下观察CHO-K1细胞表达:红色荧光蛋白(100×)

案例 3:

      利用MCI技术将客户的目的基因整合到CHO细胞基因组中,配合使用Genloci®独创产品Cell Plaza®(GP5036)筛选阳性克隆,ELISA结果分析显示,在挑选的32个克隆中,共有16个克隆的抗体表达量较高,其中3个克隆的表达量超过12.5ng/mL。


Figure3.ELISA 隆细胞表抗体

案例4:

      抗体Y 125mL摇瓶pool上清SDS-PAGE检测见figure 4,CHO-SC上清纯化后可得蛋白 272mg/L,同样条件传统CHO-S上清纯化后可得蛋白 125mg/L。生产周期4-5周,产量达到mg/10mL,满足很多客户要求,省去了很多等待时间。

Figure 4.  培养pool上清SDS-PAGE检测结果