毫克级抗体快速表达

实验流程实验案例 Q&A 文献资料服务优势

❀技术原理：

Genloci的蛋白表达专家开发出独特的以哺乳动物细胞CHO为表达载体的真核表达系统，利用吉锐生物专利的 MCI 技术，将目的基因的多个拷贝定点整合到基因组高表达位点中，同时实现稳定遗传。高效的转染技术，可以低成本，短周期为您提供mg级的高质量抗体，解决传统的表达系统所面临的多种缺陷，帮助您快速获得满意的实验结果。

❀实验流程：

1. 亚克隆：将客户优化好的抗体轻重链序列（Genloci也可以提供基因优化服务）克隆到吉锐生物定点整合载体上；
2. 转染：采用独家的CHO-MCI（多拷贝整合）技术，将定点整合载体电转到CHO-SC细胞中；
3. 稳转池验证：100ml摇瓶小试表达目的抗体和纯化。将细胞表达上清通过Protein A柱纯化后，跑SDS-PAGE，同时通过上牛血清白蛋白（BSA）作为控制带进行定量和纯度分析。
4.扩大培养：根据100ml的定量结果，估算获得客户要求数量的蛋白所需要扩大培养的体积，拿到足够量的抗体。

案例 1：

Figure1.SDS-PAGE电泳检测：抗体Y/CHO-S

案例 2：

利用MCI技术将红色荧光蛋白基因定点整合到CHO-K1细胞基因组中，配合使用Genloci®独创产品Cell Plaza^®（GP5036）筛选阳性克隆，扩大培养后，在倒置显微镜下和荧光显微镜下观察细胞。

Figure2.自然光下观察CHO-K1细胞(100×)和红色荧光下观察CHO-K1细胞表达:红色荧光蛋白（100×）

案例 3：

利用MCI技术将客户的目的基因整合到CHO细胞基因组中，配合使用Genloci®独创产品Cell Plaza^®（GP5036）筛选阳性克隆，ELISA结果分析显示，在挑选的32个克隆中，共有16个克隆的抗体表达量较高，其中3个克隆的表达量超过12.5ng/mL。

Figure3.ELISA 分析阳性克隆细胞表达基因工程抗体

案例4：

抗体Y 125mL摇瓶pool上清SDS-PAGE检测见figure 4，CHO-SC上清纯化后可得蛋白 272mg/L，同样条件传统CHO-S上清纯化后可得蛋白 125mg/L。生产周期4-5周，产量达到mg/10mL，满足很多客户要求，省去了很多等待时间。

Figure 4. 培养pool上清SDS-PAGE检测结果