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Cruiser™酶再帮科学家发表一篇论文

2017-06-15 作者:Genloci

《南京医科大学学报(自然科学版)》,第36卷第9期,发表相关学术论文《基于CRISPR/Cas9 技术建立敲除OSBPL2 基因的HeLa 细胞株》。 内容为,南京医科大学生物技术系的专家们,利用CRISPRCas9 技术构建 OSBPL2 基因(人类耳聋新的致病基因)敲除的稳定 HeLa 细胞株,成功构建了敲除 OSBPL2 基因的稳定 HeLa细胞株,为该基因体外功能的研究以及致聋机制的进一步探索提供细胞模型。文中说明使用了吉锐生物的相关试剂(Cruiser  基因敲除检测试剂盒、pGK1.1质粒、AnnealingBuffer、基因组DNA提取试剂盒)。

近年来,CRISPR/Cas9基因组编辑技术一出现便在全球范围内掀起一股研发热潮。同时,各大公司也开发出一系列相应的产品,其中一种至关重要的就是基因敲除检测的利器——基因突变识别酶。

市面上的GenlociCruiserTransgenomicSURVEYORNEBT7EI这三种产品和测序方法,被用于基因敲除阳性克隆的筛选。SURVEYOR是进口产品,价格贵,货期长;T7EI可以识别多种DNA结构,如十字形DNA结构、Holliday结构等,故易出现假阳性;测序耗时长(1-3天),常常出现测序无信号等问题。

吉锐生物不但是中国最早一批建立CRISPR/Cas9基因组编辑平台的公司,而且发明了多种专用试剂。其中,Genloci Cruiser基因敲除检测试剂盒是一款简便高效的基因突变和基因多态性检测试剂盒,该试剂盒的核心成分是 Cruiser 酶,它是一种具天然强活性的核酸内切酶,与 CelⅠ同源。该酶能够高效特异地识别异源双链 DNA 的突变位点,并从突变位点的 3-端高效地切割异源双链 DNA,不会出现假阳性。

案例:

通过酶切后核酸电泳胶图结果观察到27#49#克隆能够切出条带,将这2个克隆送测序验证后确认这2株细胞都是成功敲除的细胞株;见图一。

图一: 酶切核酸电泳胶图


  

江苏吉锐(Genloci)通过植物基因工程表达产生高纯度的Cruiser酶,同时还推出了Genloci Cruiser基因敲除检测试剂盒,广泛应用于精确检测人、哺乳动物、细菌、真菌、病毒以及植物基因的突变,也可用于基因的多态性分析。为科学研究提供了有效的研究工具,目前引起多家科研单位及公司研发人员的关注,使用中效果优良。

较早时间深圳市第二人民医院的诸研究人员,为研究困扰器官移植供体短缺问题,也曾使用我司的Cruiser酶进行实验研究,最终成功敲减目的基因,为异种器官移植提供解决之路。文章发表在“深圳中西医结合杂志”201511月第25卷第22期。

Cruiser酶产品性能

1.检测速度快:只需 20 min,便可检测到各种类型的碱基突变,如:碱基替换、插入和缺失等;

2.特异性高:根据电泳图中条带大小,可以知道突变位点的大概位置;根据电泳图中条带的数量,可以得出具体的突变数;

3.检测方便:酶切后的 PCR 产物,可以通过常规凝胶电泳快速检测;

4.检测范围广:可用于检测 100bp~10kb 长度的 DNA 杂交片段;识别范围最小为 1bp 的突变位点,最大可达上百 bp 的序列突变;

5.高通量筛选:可用 Cruiser 酶消化分析混合样本的 PCR 产物,根据电泳结果计算突变率,适用于高通量筛选。