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❀pP1C.4质粒图谱

❀pP1C.4 部分序列（AtU6 Promoter 及靶点插入位置）：

5’…..GAATTCATTCGGAGTTTTTGTATCTTGTTTCATAGTTTGTCCCAGGATTAGAATGATTAGGCATCGAACCTTCAAGAA
TTTGATTGAATAAAACATCTTCATTCTTAAGATATGAAGATAATCTTCAAAAGGCCCCTGGGAATCTGAAAGAAGAGAAGCA
GGCCCATTTATATGGGAAAGAACAATAGTATTTCTTATATAGGCCCATTTAAGTTGAAAACAATCTTCAAAAGTCCCACATCG
CTTAGATAAGAAAACGAAGCTGAGTTTATATACAGCTAGAGTCGAAGTAGTGATTtctagaGTTTTAGAGCTAGAAATAGCAAG
TTAAAATAAGGCTAGTCCGTTATCAACTTGAAAAAGTGGCACCGAGTCGGTGCTTTTTTAGAGCTGGTTTAGTGAACCGTC
AGATCCGCTAGA…..3’

EcoR I 位点：GAATTC

黄色底纹标示的序列：AtU6 Promoter

Xba I位点：tctaga

下划线标示的序列：sgRNA

※注：该启动子以碱基“G”为转录起始信号，要注意的是这个载体中不含转录起始碱基“G”，故靶位点引物设计时需要注意，说明书中已介绍。

以拟南芥AtRAN1基因为例进行oligo实操设计

（1）您可以通过以下在线工具设计：

CRISPR Design：http://cbi.hzau.edu.cn/cgi-bin/CRISPR

（2）选取

atttttcagGCTCTACCTAACCAGCAAACCGTAGATTATCCCAGCTTCAAGCTTGTCATTGTTGGTGATGGAGGCACAGgtacggt

（3）输入序列信息（以拟南AtRAN1基因为例）

（4）点submit，出现右侧结果；

（5）根据左边不同Guide序列score的高低选取合适的Guide序列，score的高低并不代表敲除效率的高低，所以为提高敲除的成功率，一般选择2-3个Guide序列，构建2-3个敲除载体。

Cat.No.	产品名称	规格	备注
GP0123	pP1C.3	4μg	单子叶植物敲除载体
GP0122	pP1C.4	4μg	双子叶植物敲除载体
GP0120	pPIC.7	4μg	单子叶植物双敲载体
GP0143	pP1C.3 with DNA Recombinase	50 rxns	单子叶植物敲除试剂盒
GP0144	pP1C.4 with DNA Recombinase	50 rxns	双子叶植物敲除试剂盒
GP0119	pP1C.7 with DNA Recombinase	50 rxns	单子叶植物双敲试剂盒

GP0144-pP1C.4 with DNA Recombinase（双子叶植物敲除试剂盒）说明书.pdf

Q-1:植物敲除试剂盒中的质粒能否在大肠杆菌中复制扩增？若将载体构建交予你们做，怎么收费？

A-1：试剂盒中的质粒能够在大肠杆菌中复制扩增，若您希望长期使用该质粒，建议在收到货后即转化至大肠杆菌中以利于长期保存和使用。敲除载体构建服务我们的收费标准是1800元/个，完成后仅提供构建完成的敲除载体和测序结果，而不提供构建的原载体以及中间载体。因敲除载体构建的特殊性，我们仅对构建的载体负责，不保证最终的敲除效果；一般的，我们建议设计2~3个不同的靶点对目的基因进行敲除。若您预期长期使用CRISPR/Cas9技术进行基因组编辑，我们推荐能购买试剂盒产品。